近日，体育学院欧高志副教授团队的研究成果——Integration of CRISPR/Cas12a and Multiplexed RPA for FastDetection of Gene Doping在Nature Index期刊Analytical Chemistry（IF: 8.008,中科院一区）上发表（图1）。体育学院2019级研究生闫嘉宇为第一作者，欧高志为唯一通讯作者，中国地质大学（武汉）体育学院是第一作者单位。
图1封面
该研究提出一种基于CRISPR/Cas12a与多重RPA技术的基因兴奋剂检测平台CasGDP。研究选择了目前具有高可能性被使用的三种基因兴奋剂（EPO，IGF-1和GH-1）作为检测靶标，设计RPA引物来扩增这些靶标的外显子-外显子连接，然后针对它们的RPA产物设计crRNA进行特异性识别，含有特定靶标的阳性样品会激活Cas12a的反式剪切活性从而剪切荧光标记的报告分子或试纸条的报告分子DNAG-三链体（TBA11），最后实现基因兴奋剂的检测（图2）。CasGDP方法展现了高特异性，crRNA可以准确识别对应靶标；对未扩增的靶标，该方法检测灵敏度为0.1nM，而经RPA扩增的靶标灵敏度可达1aM，具有较高的灵敏度。
图2图解摘要
除此之外，该研究还在HEK293细胞中建立了基因兴奋剂体外模型，成功检测到了导入的EPO外源基因。此外，将低浓度水平的靶标以不同稀释倍数加入人血清中，经RPA扩增后，也可被CasGDP方法通过荧光和试纸条在40min内进行成功检测，证明复杂基质不会明显影响到本方法的准确性。 最后，设计了一个多路微流控装置，通过基于试纸条的读数可同时检测3种基因兴奋剂。这些结果均表明，CasGDP是一种快速、方便的基因兴奋剂现场检测工具。
文章链接：https://doi.org/10.1021/acs.analchem.2c04079
